среда – IMDM или DMEM/F12 (1:1)
сыворотка – эмбриональная бычья 10%
процедура пересева – снятие клеток, используя трипсин 0,25 %: версен 0,02 % (1:1), кратность рассева 1:3, оптимальная плотность 4,5 – 5,0х103 клеток /см2 после прохождения 16 пассажа кратность рассева 1:2
криоконсервация – ростовая среда, 10% DMSO, 0,55 – 0,70х106 клеток/мл в ампуле. После размораживания содержимое криопробирки перенести на чашку Петри d 60 mm, через 2-3 часа произвести смену ростовой среды.
75% (окраска трипановым синим на нулевом пассаже)
бактерии, грибы и микоплазма не обнаружены
2n= 46, модальное число хромосом 46 (93.0±2.6%), нормальный кариотип (46,ХХ). Доля полиплоидных клеток составляет 21,8±4.1%.
ДНК профиль (STR):
Amelogenin: |
X |
Х |
CSF1PO |
10 |
12 |
D13S317 |
11 |
12 |
D16S539 |
12 |
12 |
D5S818 |
12 |
13 |
D7S820 |
11 |
11 |
THO1 |
7 |
9,3 |
TPOX |
8 |
8 |
vWA |
14 |
17 |
Линия с ограниченным сроком жизни; стадия активного репликативного старения наступает на 18 пассаже.
Экспрессия поверхностных антигенов, характерных для мезенхимных стволовых клеток:
CD44, CD73, CD90, CD105, HLA-ABC (среднее значение более 90%) и низкую экспрессию маркеров гемопоэтического ряда: CD34, CD45, HLA-DR (среднее значение < 2%).
Экспрессия рецепторов эстрогена и прогестерона изучена с помощью иммуноцитохимии. Направленная дифференцировка в остеогенном, хондрогенном и адипогенном направлениях, также подтверждена направленная дифференцировка в децидуальном направлении, индуцированная комбинацией гормонов – эстрогена (10 нМ) и прогестерона (1 мкМ) в течение 14 суток.
фармакология, клеточная биология