K562-HyPer-Nuc
K562-HyPer-Nuc
Описание
Подготовка образца к выдаче начинается только после получения оплаты и согласования приблизительной даты передачи готового материала и занимает 10-14 дней.
Один образец соответствует 2 культуральным флаконам площадью 12,5 см2 (в каждом флаконе приблизительно 20 – 30 миллионов клеток, если вам требуется большее количество клеток вы можете воспользоваться услугой "нарастить под заказ").
Характеристики
- Происхождение:
- получены на основе клеточной линии К562 (человек, хроническая миелогенная лейкемия, плевральная жидкость) методом трансдукции лентивирусным вектором, кодирующим флуоресцентный сенсор перекиси водорода HyPer
- Морфология:
- эритромиелоблатоидная
- Способ культивирования:
- суспензионный
- Условия культивирования:
-
среда - RPMI 1640
сыворотка - эмбриональная бычья 10%
процедура пересева - оптимальная плотность 1.0х105-1.0х106 клеток/мл
криоконсервация - ростовая среда, 10% DMSO, 3.0-7.0х106 клеток/мл в ампуле
- Жизнеспособность после криоконсервации:
- 80-86 % (окраска трипановым синим на нулевом пассаже)
- Контроль контаминации:
- бактерии, грибы и микоплазма не обнаружены
- Контроль видовой идентичности:
- кариологический анализ
- Кариология:
-
видовая принадлежность – человек, пределы изменчивости по числу хромосом 44-69, модальное число хромосом 58, количество маркеров -12 (дифференциальная окраска), количество полиплоидов 2%
ДНК профиль (STR):
Amelogenin: X, Х
CSF1PO: 9, 10
D13S317: 8, 8
D16S539: 11, 12
D5S818: 11, 12
D7S820: 9, 11
THO1: 9.3, 9.3
TPOX: 8, 9
vWA: 16, 16
- Эффективность клонирования:
- 65
- Другие характеристики:
-
Среднее время одного удвоения клеточной популяции 22,17 ± 3,51 ч.
Доля клеток с экспрессией HyPer- Nuc – 40%
Клетки линии K562- HyPer- Nuc экспрессируют в ядре HyPer, генетически-кодируемый биосенсор Н2О2 [Belousov et al., 2006]. HyPer – это генноинженерный белок, сконструированный путем внедрения циркулярно пермутированной формы желтого флуоресцентного белка cpYFP в регуляторный домен природного сенсора перекиси OxyR, Н2О2-чувствительного транскрипционного фактора из E.coli. Максимум полосы флуоресценции HyPer расположен в зеленой области спектра (516 нм). Под действием Н2О2 в домене OxyR образуется дисульфидная связь, домен претерпевает конформационные изменения, которые влияют на оптические свойства cpYFP – меняется соотношение пиков при 500 и 420 нм в спектре возбуждения флуоресценции. HyPer- Nuc – версия биосенсера, локализующаяся в ядре клеток. Ратиометрический сигнал HyPer- Nuc (отношение его флуоресцентных сигналов при длинах волн возбуждения 488 и 405 нм) используется в качестве маркера окислительных возмущений в клеточном ядре. HyPer- Nuc – рН-зависимый индикатор, для проведения контрольных измерений рекомендуется использовать родственный по структуре флуоресцентный генноинженерый белок SypHer – Н2О2-независимый, но чувствитеный к изменению внутриклеточного показателя рН биосенсор [Bilan and Belousov, 2016]
- Область применения:
- клеточная биология, биотехнология
- Коллекции:
- Коллекция культур клеток позвоночных Института цитологии РАН, г. Санкт-Петербург
- Источник получения:
- лейкемия миелогенная хроническая (плевральная жидкость)
- Видовая принадлежность:
- Человек (Homo sapiens)